Archive for the '生物方面' Category

一些分子生物学实验汇总

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下面是环境生物技术领域常用的一些分子生物学实验操作流程及数据处理的方法,这些实验的大致作用就是弄清楚一个样品中有些什么微生物,总共有多少种,每种的含量是多少。

0. PCR, 这个步骤就不需要写了,听听PCR之歌

1. PCR-DGGE操作步骤

2. 用Quantity One进行定量分析的方法

3. T-RFLP操作步骤

4. 使用GeneMarker分析T-RFLP数据

5. 克隆的方法及操作步骤

6. 感受态细胞制备方法

7. 荧光原位杂交(FISH)实验操作步骤

PCR之歌

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大约2年多以前,Biorad(伯乐)公司为了宣传推广其新产品,创作了下面这个PCR之歌。听了好几遍,每次都觉得蛮有意思的。PCR (polymerase chain reaction, 聚合酶链式反应),是一种特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术,这项技术的发明对生物学的发展具有划时代的意义。想了解等多有关PCR的知识,可以查看聚合酶链式反应(百度百科,中文)或Polymerase chain reaction(维基百科,英文)
不多说了,看视频,听歌!
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感受态细胞制备方法

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大肠杆菌感受态细胞(competent cell)是分子克隆操作中的关键材料,所谓感受态细胞就是经过物理或化学方法处理过,细胞壁的通透性大大增强,更容易接受外源DNA进入的大肠杆菌细胞。

感受态细胞的制备方法有很多,如:电击法,CaCl2法,TFB法,TSS法等。还有一种最最简单的方法就是直接买法……
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克隆的方法及操作步骤

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这里的克隆是指分子克隆(molecular clone) 或基因克隆,跟克隆羊、克隆人不是一回事,想整个克隆人玩玩的同学别往下看了,完全照着做也克隆不出来。

分子克隆是一个常用的、非常成熟的分子生物学实验。环境生物学实验中常用的对某DNA片段进行克隆,构建克隆文库的方法及大致操作流程如下:
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使用GeneMarker分析T-RFLP数据

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按照T-RFLP操作流程得到数据后,需要对进行分析处理。T-RFLP数据分析软件有很多,GeneMarker是其中一个。分析T-RFLP数据的主要目的就是看有几个峰,每个峰所占的比例是多少,与Quantity One分析DGGE结果有点类似。使用GeneMarker分析T-RFLP结果的大致方法如下,比较粗略,具体各个参数的意义,请参考GeneMarker手册或相关教程:
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T-RFLP操作步骤

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T-RFLP (Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism) 和DGGE类似,也是一种可以用于分析微生物群落结构的DNA Fingerprinting方法。与DGGE相比它重复性更好,定量更准确,实验流程也比DGGE的操作步骤简单很多,而且不像DGGE那样,要进行很多次反复的优化才能得到比较好的结果。但是T-RFLP的成本要比DGGE高一些,主要因为T-RFLP最后一步要用测序仪完成。下面是T-RFLP的简要操作流程:
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PCR-DGGE操作步骤

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变性梯度凝胶电泳(Polymerase Chain Reaction-Denaturing Gradient Gel Electrophoresis, PCR-DGGE)和FISH一样,也是一个常用的分子生物学实验,在环境生物技术领域常用于分析微生物群落的多样性。DGGE实验的大体操作流程如下,比较麻烦,影响因素很多,有一段时间我曾经天天捣鼓PCR-DGGE,反复优化各个条件,非常无聊。
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荧光原位杂交(FISH)实验操作步骤

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荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是一个很重要的生物学实验技术,它的特点是原位,无需经过PCR,可以用于对环境样品中特定的微生物进行定量分析。下面是以活性污泥为例的FISH实验步骤及方法。非生物学专业的同学请不要往下看了。
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批量Blast小程序

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问题是这样的:有很多很多序列,几百条,想大致了解一下这些序列分别是什么样的微生物,如果一条一条去blast,那是相当的累。想找一个工具告诉我每条序列blast结果的前几条的名称是什么即可,不需要其它信息。

在网上找了一下,没找到合适的软件或工具,虽然有些关于批量blast的教程之类的,比如这个,但是给出的结果及其繁琐,很多不需要的信息。

后来发现Biopython可以很简单就进行批量Blast。只需先安装PythonBiopython,Python和Biopython的下载地址分别为:
http://www.python.org/download/
http://www.biopython.org/wiki/Download

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关于454测序

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昨天和师兄一起去港大的Genome Research Center了解了一下关于454测序的情况,那边的老师很耐心地给我们作了相关介绍。今天把了解到的内容简单整理一下:

1. 454测序原理
简单说就是把DNA样品中的每条DNA连到一个小球上,然后通过一系列的反应和操作,可以得到从小球开始的大约400个bp的序列。一个454测序反应理论上可以得到100万条序列,考虑到效率的问题,实际得到的序列可能略少一些。
具体说来非常复杂,就不说了。

2. 454测序可以用来干什么?
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